荧光显微镜标本制作材料及方法

荧光显微镜标本制作材料及方法

荧光样本制作所需材料

(一)载玻片

滑板厚度应在0.8毫米至1.2毫米之间。工业视频显微镜将传统的显微镜与摄像系统,显示器或者电脑相结合,达到对被测物体的放大观察的目的。金相显微镜电脑型金相显微镜或是数码金相显微镜是将光学显微镜技术、光电转换技术、计算机图像处理技术完美地结合在一起而开发研制成的高科技产品，可以在计算机上很方便地观察金相图像，从而对金相图谱进行分析，评级等以及对图片进行输出、打印。体视显微镜指从不同角度观察物体,使双眼引起立体感觉的双目显微镜。过厚的斜坡一方面可以吸收*多的光，另一方面也不能使激发光聚集在试样上。切片必须光滑，厚度均匀，没有明显的自体荧光。有时使用石英玻璃载玻片。

(二)盖玻片

盖玻片约0.17mm厚，光滑。为了增强激发光，也可以使用干涉盖玻片。这是一种特殊的盖玻片，表面涂有几层对不同波长的光有不同干涉作用的物质(如氟化镁)。能使荧光顺利通过，反射激发光，激发标本。

(三)标本

组织切片或其他标本不能太厚，如太厚激发中国光大这一部分企业消耗在标本下部，而物镜直接可以观察到的上部不充分问题激发。另外，细胞重迭或杂质掩盖，影响分析判断。

(四)封裱剂

甘油通常用作密封剂，它必须无自发荧光，无色透明，荧光亮度在pH8.5～9.5范围内明亮，不易迅速褪色。 因此，通常使用pH 9.0-9.5的甘油和0.5mol/l碳酸盐缓冲液的相等混合物作为密封剂。

(五)镜油

在金相荧光显微镜和油镜观察样品时，需要使用镜油，请使用专用非荧光镜油，或使用上述甘油，也可以使用液体石蜡，但折射率低，对图像质量影响不大。

荧光标本的制作方法：

样品必须石蜡包埋，然后用苏木精铁矾染色，普通工业显微镜也可用荧光 DAPI 染色观察,

石蜡切片的过程：

1. 取材：刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜. 取材时间越快越好.

2. 固定: 组织可以取下后应立即将其放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定.

注: (1)固定剂的体积应为组织块体积的40倍。

固定时间：固定时间与所用固定液的类型、组织块的大小、温度等有关，一般为3h-24h。

(3)固定工作温度：大多企业可在室温以及固定, 在低温(4℃)时间应延长.

(4)固定容器:固定容器要大一些。

3. 漂洗：流水冲洗2—10h.

4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精.

70%（分钟）→ 80%（60-120'）→ 90%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ ****（60-120'）→ ****（60-120'）。

5.透明: 组织块脱水后，必须通过溶剂与酒精混合溶解石蜡，然后石蜡进入组织块。常用的二甲苯，一般浸泡30米即可。

6.浸蜡:将透明后的组织浸入融化的石蜡中的过程称为浸蜡。一般需要蘸2-3次，总时间3-4小时。浸蜡用石蜡的熔点为52-56℃。

7. 包埋: 先将熔化的石蜡溶液倒入其中包埋框再用一个加热的镊子将组织块放入.